人源化CD3單抗助力T細胞藥物開發

CD3單抗是免疫細胞藥物開發中的核心原料，北京同立海源生物十余年專注細胞與基因治療（CGT）上游核心試劑原料的研發生產。擁有哺乳動物細胞表達蛋白質工程平臺，采用基因重組方法，將原有CD3單克隆抗體（克隆OKT3）做人源化改造，在保持了OKT3單抗對T細胞激活能力的前提下，最大程度上消除了鼠源性抗體的免疫原性，在腫瘤殺傷方面發揮著重要作用。

在細胞和基因治療領域，北京同立海源生物自主開發的人源化CD3單抗（貨號:GMP-TL101），已支持多家客戶的T細胞藥物申報IND。

GMP級—抗人CD3單克隆抗體

CD3是一種多聚體蛋白復合物，由四條不同的肽鏈組成：ε、γ、δ和ζ。這些不同肽鏈組裝形成二聚體（εγ, εδ, ζζ）并發揮功能。CD3復合物作為T細胞共受體，與T細胞受體（TCR）以非共價方式結合，形成TCR-CD3復合體（Smith-Garvin等人，2009）。CD3蛋白復合物是T細胞譜系的標志性分子，因此抗CD3抗體廣泛地應用于T細胞標記。

CD3蛋白結構和功能

TCR-CD3復合體在胸腺細胞的成熟和T細胞活化中發揮著重要作用。TCR本身不能結合游離的抗原肽，其只能識別主要組織相容性抗原（MHC）分子提呈的抗原。TCR由異源二聚體構成，如TCRα和TCRβ。TCR與MHC提呈的抗原相結合后，導致T細胞的活化。不過，由于TCR的胞內區蛋白質序列較短，缺乏信號傳導所需結構域，不能傳遞活化信號，因此需要由CD3蛋白復合物啟動細胞內信號傳導。

CD3蛋白亞基由胞外區、跨膜區和胞內區組成。其胞內區含有免疫受體酪氨酸激活基序（ITAM），是TCR信號通路活化的關鍵結構域。CD3ε、γ和δ亞基的胞內含有一個ITAM結構域，而CD3ζ亞基的細胞質區域包含三個ITAM結構域。因此，一個TCR-CD3復合體含有十個ITAM結構域，使得該復合體對抗原提呈信號非常敏感。

MHC-抗原/TCR相結合后，CD3多肽鏈胞內ITAM結構域中保守的酪氨酸基序被蛋白酪氨酸激酶磷酸化，進而招募ZAP70。反過來，Zap70磷酸化TCR信號級聯反應中的其他蛋白質，最終導致T細胞活化。根據T細胞活化的雙信號理論，上述抗原特異性信號是第一信號。CD28、ICSO和CD40L等共刺激分子與其配體相互作用提供第二信號。雙信號同時存在才能導致T細胞的完全活化。

CD3抗體是第一個在臨床上應用的單抗藥物，用于降低器官移植病人急性排斥反應的免疫抑制劑。CD3抗體治療器官排斥反應主要是通過4種機制：（1）“包被”作用（Coating），CD3抗體結合CD3蛋白后，包被（Coating）在T細胞表面，阻斷了T細胞與抗原提呈細胞或其他免疫細胞的相互作用，達到抑制免疫反應發生的目的；（2）清除T細胞。CD3抗體進入體內后，可以通過補體依賴或抗體介導的細胞毒作用導致T細胞的死亡；（3）TCR表面表達下調。CD3抗體結合CD3蛋白后，導致TCR胞外區脫落或內化，提高了T細胞活化的閾值，致使T細胞不能充分應答抗原提呈作用；（4）CD3信號傳導。CD3抗體結合不同免疫細胞的CD3蛋白后產生不同的信號轉導效應，結合致病性T細胞會誘導其凋亡，而結合調節性T細胞則導致其擴增，綜合效應是引起機體免疫抑制。

近年來，CD3雙特異性抗體（CD3-bispecific antibodies，CD3-BsAbs）是癌癥免疫治療領域的一種新興治療方式。CD3 BsAbs通過同時結合腫瘤細胞上表達的腫瘤相關抗原和T細胞上的CD3發揮作用。CD3-BSAb將這兩種細胞類型交聯，可以形成免疫突觸，類似于天然T細胞受體（TCR）/肽-主要組織相容性復合體（MHC）復合體。這種突觸導致T細胞活化，從而分泌炎癥細胞因子和細胞溶解性分子，從而殺死腫瘤細胞。CD3 BsAbs的優勢在于，無論TCR的特異性如何，任何T細胞都可以作為效應細胞。對于這些BsAbs，TCR信號不需要TCR的抗原結合域參與，而是通過CD3啟動。因此，CD3 BSAb可以利用所有可用的T細胞，并且不限于腫瘤特異性T細胞，這點與免疫檢查點治療的要求不同，也是其一大優勢。

不過，CD3抗體的應用因其明顯的副作用也受到了阻礙，例如它的免疫原性和有絲分裂潛能。人源化抗體改造是降低抗體免疫原性的有效手段。北京同立海源生物作為國內專注基因/細胞治療GMP級上游原料生產企業，獨具技術優勢的哺乳動物細胞表達平臺，自主研發了人源化的CD3抗體，可以用于抗體標記、T細胞的體外活化和免疫系統人源化小鼠T細胞清除等科學研究。人源化抗體因其低免疫原性，將為實驗數據的認可性和后續的成果轉化提供強大保證。

產品推薦： 抗人CD3單克隆抗體，貨號：GMP-TL101

一、人源化改造及細胞制備

北京同立海源生物采用基因重組方法，將原有CD3 單克隆抗體（克隆OKT3）做人源化改造，在保持了OKT3單抗對T細胞激活能力的前提下，最大程度上消除了鼠源性抗體的免疫原性，在此基礎上利用CHO細胞表達人源化改造的后抗體能更好地應用于臨床細胞藥物的研發，在腫瘤殺傷方面發揮著重要作用。相對于其他采用雜交瘤技術制備的CD3單克隆抗體，生產過程中使用完全化學界定無血清培養基，真正做到無血清、無動物源、無任何外源因子，完全避免了傳統雜交瘤技術生產的CD3單克隆抗體對細胞培養可能產生的不利影響，大大提高了產品的穩定性、安全性。

二、安全性高

安全是細胞培養的首要條件。CD3單克隆抗體的內毒素水平直接影響到后期所收獲免疫細胞的內毒素含量。由于免疫細胞制品對內毒素具有嚴格的要求，一般內毒素水平必須控制在5EU的水平。北京同立海源生物采用人源細胞進行CD3單克隆抗體的生產，整個生產環節均在GMP環境中完成，無動物源性、無外源因子，無內毒素風險，純化及貯存過程加以嚴格的內毒素控制，所有批次產品嚴格控制內毒素含量不高于0.1 EU/μg，完全滿足免疫細胞制備的要求。

三、高純度

抗體純化受到抗體的生產體系、初始純度、親合分離介質質量、純化方案、儲存方案等諸多條件的影響。為了獲得高質量的CD3單克隆抗體，北京同立海源生物采用自主研發生產的親和分離介質，并對抗體結合、洗脫條件進行不斷優化，保證每個批次的CD3單克隆抗體經HPLC檢測純度達99%。

· CD3單抗純度檢測

四、高活性、高穩定性

流式細胞術可用于檢測CD3抗體與Jurkat細胞（人外周血白血病T細胞）表面CD3 的結合活性，從而評估CD3抗體的生物學活性。實驗結果表明，北京同立海源生物的CD3抗體在低濃度100-300ng/mL時即可與Jurkat細胞有很好的結合活性。較好的細胞因子活性能更好的刺激T細胞的增殖 。

五、 批次穩定性高，現貨供應

北京同立海源生物配備GE公司生物反應器，擁有大規模細胞培養表達能力，能夠實現CD3單克隆抗體的大量制備，滿足您隨時的訂購需求。產品質量穩定、批間差異小，對基礎研究以及臨床級免疫細胞制備均有較好的應用前景。

參考資料：

[1] Fabio Candotti, Luigi D. Notarangelo, in Stiehm's Immune Deficiencies (Second Edition), 2020.

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